As tecnologias mais recentes, como AlphaLISA ™, HTRF® e DELFIA® surgiram precisamente para solucionar essas limitações. Todas elas eliminam as etapas de lavagem e separação, simplificando o fluxo de trabalho sem comprometer a qualidade analítica.
De imunoensaios heterogêneos a imunoensaios homogêneos
O método ELISA clássico requer múltiplas etapas de incubação e lavagem, o que aumenta a variabilidade entre os poços e limita a miniaturização.
Em contraste, tecnologias homogêneas como AlphaLISA ™ e HTRF® Eles permitem que todo o teste seja realizado em uma única mistura e no mesmo poço, reduzindo o tempo experimental e os erros de manipulação.
Além disso, ao eliminar as etapas de lavagem, essas técnicas tornam-se mais reproduzíveis. Automatizável e escalável, características essenciais em laboratórios que trabalham com grandes volumes de amostras ou projetos de triagem de medicamentos (HTS).
AlphaLISA ™ : Sensibilidade e versatilidade sem lavagem
Tecnologia AlphaLISA ™ Baseia-se em microesferas emissoras e receptoras que geram um sinal luminescente quando estão próximas (após a ligação analito-anticorpo).
Seu princípio físico permite a detecção de interações proteína-proteína, receptor-ligante ou antígeno-anticorpo com sensibilidade na faixa picomolar ou mesmo femtomolar.
É especialmente útil para:
- Detecção de imunoglobulinas humanas ou murinas (IgG, IgM, IgE, fragmentos Fc).
- Ensaios de ligação de citocinas e receptores (TNF/TNFR, IL6/IL6R, IL23/IL23R, etc.).
- Estudos de pontos de controle imunológico (PD-1/PD-L1, CTLA4/CD80, CD47/SIRPα).
Graças ao seu formato homogêneo, o AlphaLISA é ideal para laboratórios que buscam altas taxas de leitura e manipulação mínima , sem comprometer a sensibilidade.
HTRF® : Fluorescência com resolução temporal para máxima precisão.
A tecnologia HTRF® (Fluorescência Homogênea Resolvida no Tempo) combina a técnica FRET (transferência de energia por ressonância) com a fluorescência retardada de lantanídeos, como o európio ou o térbio.
Esse atraso nos permite evitar a autofluorescência e o ruído de fundo, oferecendo resultados mais precisos mesmo em matrizes biológicas complexas.
Entre suas principais aplicações estão:
- Ensaios de sinalização intracelular (GPCR, fosforilação de proteínas).
- Interações proteína-receptor ou proteína-proteína.
- Estudos de afinidade e cinética de anticorpos.
A HTRF é uma alternativa natural ao ELISA em casos onde é necessária uma quantificação rápida, sem lavagem e com uma maior faixa dinâmica.
DELFIA® : a ponte entre ELISA e técnicas homogêneas
A tecnologia DELFIA® mantém um formato semelhante ao do ELISA tradicional, mas introduz a detecção fluorescente com resolução temporal em vez da leitura colorimétrica.
Essa melhoria expande significativamente a faixa dinâmica e a estabilidade do sinal, resultando em maior precisão na quantização.
Além disso, os reagentes de citotoxicidade DELFIA ™ EuTDA permitem a medição da citotoxicidade celular (ADCC) sem recorrer a radioisótopos, substituindo de forma segura e sensível os antigos ensaios de liberação de cromo-51.
Aplicações atuais em pesquisa
Essas tecnologias abrangem todas as etapas do desenvolvimento de biofármacos:
- Triagem de candidatos utilizando ensaios de ligação receptor-ligante.
- Caracterização funcional de anticorpos terapêuticos (ADCC, CDC, afinidade por FcγR e FcRn).
- Controle de bioprocessos (detecção de proteínas do hospedeiro, DNA residual, albumina sérica).
Sua compatibilidade com equipamentos multimodo, como VICTOR ™ Nivo™, EnSight™ ou EnVision™ Nexus™ da Revvity permitem que todos esses ensaios sejam integrados em uma única plataforma de leitura.
Rumo a uma nova geração de imunoensaios
Adotar tecnologias homogêneas, como AlphaLISA ™ e HTRF® não apenas simplificam o trabalho diário: representam uma mudança de paradigma na forma como os imunoensaios são abordados.
Na Proquinorte , apoiamos os laboratórios que dão esse passo, oferecendo assessoria técnica e acesso a kits e equipamentos de última geração para pesquisa biológica.
