Las tecnologías más recientes, como AlphaLISA™, HTRF® y DELFIA®, han surgido precisamente para cubrir estas limitaciones. Todas ellas eliminan los pasos de lavado y separación, simplificando el flujo de trabajo sin sacrificar la calidad analítica.
De los inmunoensayos heterogéneos a los homogéneos
El ELISA clásico requiere múltiples etapas de incubación y lavado, lo que aumenta la variabilidad entre pocillos y limita la miniaturización.
En cambio, las tecnologías homogéneas como AlphaLISA™ y HTRF® permiten realizar todo el ensayo en una sola mezcla y en el mismo pocillo, reduciendo el tiempo experimental y los errores por manipulación.
Además, al eliminar las etapas de lavado, estas técnicas resultan más reproducibles, automatizables y escalables, características esenciales en laboratorios que trabajan con grandes volúmenes de muestras o proyectos de cribado de fármacos (HTS).
AlphaLISA™: sensibilidad y versatilidad sin lavados
La tecnología AlphaLISA™ se basa en microesferas emisoras y receptoras que generan una señal luminescente cuando se encuentran en proximidad (tras la unión analito-anticuerpo).
Su principio físico permite detectar interacciones proteína-proteína, receptor-ligando o antígeno-anticuerpo con una sensibilidad en el rango picomolar o incluso femtomolar.
Es especialmente útil para:
- Detección de inmunoglobulinas humanas o murinas (IgG, IgM, IgE, fragmentos Fc).
- Ensayos de unión de citocinas y receptores (TNF/TNFR, IL6/IL6R, IL23/IL23R, etc.).
- Estudios de checkpoints inmunitarios (PD-1/PD-L1, CTLA4/CD80, CD47/SIRPα).
Gracias a su formato homogéneo, AlphaLISA es ideal para laboratorios que buscan altas tasas de lectura y mínima manipulación, sin comprometer la sensibilidad.
HTRF®: fluorescencia resuelta en el tiempo para máxima precisión
HTRF® (Homogeneous Time-Resolved Fluorescence) combina la técnica FRET (transferencia de energía por resonancia) con la fluorescencia retardada de lantánidos como el europio o el terbio.
Este retardo permite evitar la autofluorescencia y el ruido de fondo, ofreciendo resultados más precisos incluso en matrices biológicas complejas.
Entre sus principales aplicaciones destacan:
- Ensayos de señalización intracelular (GPCR, fosforilación de proteínas).
- Interacciones proteína-receptor o proteína-proteína.
- Estudios de afinidad y cinética de anticuerpos.
HTRF es una alternativa natural al ELISA en aquellos casos donde se requiere cuantificación rápida, sin lavados y con mayor rango dinámico.
DELFIA®: el puente entre ELISA y las técnicas homogéneas
La tecnología DELFIA® mantiene un formato similar al del ELISA tradicional, pero introduce una detección fluorescente resuelta en el tiempo en lugar de una lectura colorimétrica.
Esta mejora amplía notablemente el rango dinámico y la estabilidad de la señal, lo que se traduce en una mayor precisión en la cuantificación.
Además, los reactivos DELFIA™ EuTDA Cytotoxicity permiten medir citotoxicidad celular (ADCC) sin recurrir a radioisótopos, reemplazando de forma segura y sensible los antiguos ensayos de liberación de cromo-51.
Aplicaciones actuales en investigación
Estas tecnologías cubren todas las etapas del desarrollo de bioterapéuticos:
- Cribado de candidatos mediante ensayos de unión receptor-ligando.
- Caracterización funcional de anticuerpos terapéuticos (ADCC, CDC, afinidad por FcγR y FcRn).
- Control de bioprocesos (detección de proteínas huésped, ADN residual, albúmina sérica).
Su compatibilidad con equipos multimodo como VICTOR™ Nivo™, EnSight™ o EnVision™ Nexus™ de Revvity, permite integrar todos estos ensayos en una única plataforma de lectura.
Hacia una nueva generación de inmunoensayos
Adoptar tecnologías homogéneas como AlphaLISA™ y HTRF® no solo simplifica el trabajo diario: representa un cambio de paradigma en la manera de abordar los inmunoensayos..
En Proquinorte, acompañamos a los laboratorios que están dando este paso, ofreciendo asesoramiento técnico y acceso a kits y equipos de última generación para investigación en biológicos.
